Культуральные исследования что это такое


Культуральный метод

Культуральный метод - это этап бактериологических исследований. Для выявления и определения возбудителя инфекционного заболевания проводят посев материала от больного на питательные среды. После выделения культуры (чистых колоний микроорганизма) проводят лабораторное изучение свойств и определение возбудителя. С помощью культурального исследования можно выявить заболевания, вызванные не только болезнетворной, но и условно-болезнетворной микрофлорой. Это наиболее дорогостоящий и длительный, но очень точный метод исследований, на основании результатов которого назначают антибактериальную терапию. Для проведения бактериологического посева необходимы сведения о предварительном диагнозе. Материал от больного сеют на питательную среду и помещают в определенные условия (температура, доступ или отсутствие кислорода и др.). Условия выращивания культуры и питательные среды подбирают в зависимости от возбудителя, который предположительно собираются получить на основании предварительного диагноза. По возможности используют элективные питательные среды, на которых растет только определенный вид микроорганизмов. Универсальной питательной средой является кровяной агар - в такой среде растут большинство микроорганизмов, особенно относящихся к условно-болезнетворным.

Бактериологическое исследование занимает обычно 3-е суток. В это время при необходимости больному назначают антибиотики широкого спектра действия. После получения заключения исследования лечение корректируют.

Недостатком этого метода являются особые требования к забору материала от больного, в качестве которого выступают кровь, кал, моча, соскобы с кожи и слизистых. Биоматериал от пациента берут до начала антибактериальной терапии в стерильную герметично закрытую емкость. Перед закрытием стерильной пробирки или флакона с биоматериалом края отверстия обжигают пламенем спиртовки. Биоматериал хранят в холодильнике. Мочу и кровь собирают в сухую посуду, а прочий биоматериал в посуду с консервантом. В лаборатории стерильным шпателем или металлической петлей делают посев биоматериала - штриховыми движениями распределяют его по питательной среде. В материале от больного могут содержаться посторонние микроорганизмы, способные помешать выделению культуры возбудителя. В этом случае используют биологический метод выделения культуры возбудителя заболевания. Если существует вероятность содержания возбудителя в биоматериале в очень малом количестве, то посев делают на жидкие обогащенные питательные среды, так как в жидкой среде размножение микроорганизмов происходит более активно. Далее биоматериал повторно сеют, но уже на плотные питательные среды. Бактериологические посевы в жидкие питательные среды делают в пробирках, а в плотные - в чашках Петри. Посуду с посевом помещают в термостаты для создания оптимальных условий для роста колоний предполагаемого возбудителя заболевания. На первом этапе в питательной среде обычно вырастают колонии нескольких микроорганизмов, поэтому по внешним признакам отбирают чистые колонии предполагаемого возбудителя - культуру. Культуру возбудителя исследуют сначала невооруженным глазом, а затем с помощью микроскопа. При описании колоний микроорганизма имеют значение их размеры и форма, характеристики краев и поверхности, консистенция, структура. Далее готовят препарат для микроскопии, окрашивают его. В процессе микроскопии определяют особенности окрашивания культуры (если оно происходит), структуру клеток. Таким образом, определяют принадлежность возбудителя к определенному роду микроорганизмов. Часть культуры повторно сеют на питательные среды и в течение 18-24 ч. выдерживают в термостате, накапливая микроорганизмы для дальнейшего исследования. Число выросших колоний имеет большое значение для выявления заболеваний, вызванных условноболезнетворной микрофлорой. Большое число колоний в этом случае свидетельствует о чрезмерном росте микроорганизмов, являющихся причиной заболевания. Каждая колония разрастается из одного микроорганизма, поэтому, учитывая количество консерванта и жидкой питательной среды, в которых разводят биоматериал, и число выросших колоний, можно определить содержание микроорганизмов в полученном от больного материале. Далее проводят точное определение вида возбудителя с помощью изучения его биохимических, токсигенных и антигенных свойств. Для выявления биохимических свойств микроорганизма делают посев на различные питательные среды и изучают происходящие в них ферментативные реакции. Микроорганизмы способны расщеплять белки и углеводы, восстанавливать и окислять различные вещества. При этом каждый микроорганизм имеет в своем составе или выделяет в процессе жизнедеятельности определенные ферменты, которые вызывают соответствующие реакции. Токсигенные свойства определяют реакцией нейтрализации, для проведения которой используют анатоксины. При необходимости выявляют подвид микроорганизмов фаготипированием и изучением антигенных свойств. Фаготипирование заключается в посеве культуры возбудителя на плотную питательную среду, к выросшим колониям добавляют диагностические фаги (пожиратели микроорганизмов). Поглощая возбудителя заболевания, фаги разрушают его колонии. При этом возбудитель может быть чувствительным сразу к нескольким фагам. В ходе культурального исследования определяют чувствительность возбудителя к противомикробным препаратам. При бактерионосительстве в биоматериале болезнетворный микроорганизм содержится в малом количестве, поэтому для его выявления проводят повторные исследования. Существуют экспресс-методы культурального исследования, проводимые с помощью индикаторных бумажек. Культуру возбудителя можно получить уже через 6-12 ч. без многочисленных посевов.

analizy.vse-zabolevaniya.ru

Культуральный (бактериологический) метод исследования

Бактериологический метод исследования (БЛМИ) – метод, основанный на выделении чистых культур бактерий с помощью культивирования на питательных средах и их идентификации до вида на основании изучения морфологических, культуральных, биохимических, генетических, серологических, биологических, экологических характеристик микроорганизмов.

Бактериологическую диагностику инфекций проводят, используя стандартные диагностические схемы, утвержденные Министерством здравоохранения.

Чистая культура – бактерии одного вида, выращенные на питательной среде, свойства которых находятся в процессе изучения.

Штамм – идентифицированная чистая культура микроорганизмов одного вида, выделенная из определенного источника в определенное время. Штаммы одного вида могут несущественно отличаться биохимическими, генетическими, серологическими, биологическими и др. свойствами, а также местом и временем выделения.

Цели БЛМИ:

1. Постановка этиологического диагноза: выделение чистой культуры микроорганизмов и её идентификация.

2. Определение дополнительных свойств, например, чувствительности микроорганизма к антибиотикам и бактериофагам.

3. Определение количества микроорганизмов (важно в диагностике инфекций, вызываемых УПМ).

4. Типирование микроорганизмов, т. е. определение внутривидовых различий на основании изучения генетических и эпидемиологических (фаговаров и сероваров) маркёров. Это используется в эпидемиологических целях, т. к. позволяет установить общность микроорганизмов, выделяемых от разных больных и из разных объектов внешней среды, в различных стационарах, географических регионах.

БЛМИ включает несколько этапов, различных для аэробов, факультативных анаэробов и облигатных анаэробов.

I. Этапы блми при выделении чистой культуры аэробов и факультативных анаэробов.

1 Этап.

А. Забор, транспортировка, хранение, предварительная обработка материала. Иногда до посева проводят селективную обработку материала с учетом свойств выделяемого микроорганизма. Например, перед исследованием мокроты или другого материала на присутствие кислотустойчивых микобактерий туберкулеза, материал обрабатывают растворами кислот или щелочей.

Б. Посев в среду обогащения (при необходимости). Его проводят, если в исследуемом материале содержится малое количество бактерий, например, при выделении гемокультуры. Для этого кровь, взятую на высоте лихорадки в большом объёме (8–10 мл у взрослых, 4–5 мл у детей) засевают в среду в соотношении 1:10 (для преодоления действия бактерицидных факторов крови); посев инкубируют при температуре 370С 1824 ч.

В. Микроскопия исследуемого материала. Из исследуемого материала готовят мазок, окрашивают его по Граму или другим методом и микроскопируют. Оценивают присутствующую микрофлору, ее количество. В ходе дальнейших исследований должны быть выделены микроорганизмы, присутствовавшие в первичном мазке.

Г. Посев на питательные среды с целью получения изолированных колоний. Производят посев материала петлёй или шпателем методом механического разобщения на чашку с дифференциально-диагностической или селективной средой с целью получения изолированных колоний. После посева чашку перевора­чивают дном кверху (чтобы избежать размазывания колоний капельками конденсационной жидкости), подписывают и помещают в термостат при температуре 370С на 18-24 ч.

Следует помнить, что при посевах и пересевах микробных культур внимание работающего должно быть обращено на соблюдение правил асептики для предупреждения контаминации питательных сред и предупреждения заражения окружающих и самозаражения!

В случае инфекций, вызываемых условно-патогенными микроорганизмами, где имеет значение количество присутствующих микроорганизмов в патологическом материале, делают количественный посев материала, для чего предварительного готовят ряд 100-кратных разведений материала (обычно 3 разведения) в стерильном изотоническом растворе хлорида натрия в пробирках. После чего по 50 мкл каждого разведения высевают на питательные среды в чашках Петри.

studfiles.net

Культуральное исследование

Метод посева и выделения чистых культур возбудителей заболевания служит «золотым стандартом» микробиологической диагностики. Для посева материал берут из мочеиспускательного канала, шейки матки, влагалища, глотки и прямой кишки. Культуральное исследование наряду с микроскопией – основной метод при диагностике гонореи, трихомониаза, хламидиоза. Методы молекулярнобиологического исследования пока недостаточно специфичны для выявления этих возбудителей ИППП, чтобы вытеснить классические методы, но, несомненно, им принадлежит будущее (рис.1). Другая ситуация сложилась с оппортунистическими инфекциями половых путей, число которых в эру антибиотиков и урбанизации жизни общества неуклонно увеличивается, динамично меняется их этиологическая структура и чувствительность к антибиотикам. Частая антибиотикорезистентность этих микроорганизмов становится причиной неэффективности лечения, поэтому адекватный выбор рациональной этиотропной терапии в современных условиях признают постоянной клинической проблемой.

Известно, что возбудителями воспалительных процессов половых органов могут быть разнообразные УПМ, в норме входящие в состав транзиторного компонента индигенной (нормальной) микрофлоры. Их патогенные свойства проявляются лишь в определённых условиях нарушения иммунного гомеостаза макроорганизма и местной колонизационной резистентности. В этих условиях микробиологическая диагностика должна учитывать возможную этиологическую роль широкого круга патогенов, а не только какого-либо конкретного возбудителя, как при диагностике классических инфекционных заболеваний, вызываемых абсолютными патогенами. Задачей исследования становится не только идентификация микроорганизмов, обнаруженных в патологическом материале, но и обоснование их этиологической роли в воспалительном процессе. Поэтому при посеве клинического материала, особенно из локусов, и в норме имеющих микрофлору, очень важно использовать наиболее универсальные питательные среды, которые пригодны для культивирования широкого круга микроорганизмов. При этом необходимо учитывать количественные соотношения роста различных видов микроорганизмов в первичном посеве, так как истинному возбудителю чаще всего принадлежит превалирующая роль среди ассоциантов. Однако есть виды, которые и в небольшом количестве проявляют патогенные свойства (стрептококки групп А и В, протеи, клебсиеллы, золотистый стафилококк, листерии и др.).

Микробиологическая диагностика оппортунистических инфекций а базируется на интегральной оценке результатов микроскопического и культурального исследований. При этом строго анаэробный компонент оценивают по микроскопии граммазков – большое количество анаэробных морфотипов, выявляемых при световой микроскопии, свидетельствует об их этиологической роли. При этом определение чувствительности анаэробов к антибиотикам в настоящее время не имеет клинической целесообразности, так как в подавляющем большинстве они высокочувствительны к антибиотикам с антианаэробной активностью (клиндамицин, метронидазол).

Напротив, что касается факультативно-анаэробных и аэробных микроорганизмов, то диагностическая ценность микроскопического исследования отделяемого слизистых значительно снижается. Это связано, во-первых, с тем, что патогенные возможности этих бактерий могут проявляться при сравнительно небольшом (3 – 5 lg КОЕ/мл) их количестве, которое не выявляют при микроскопии. Во-вторых, даже если морфотипы факультативно-анаэробных бактерий обнаруживают в граммазках, морфологически они однотипны у многих видов и родов бактерий (это колиформные палочки или грамположительные кокки). В то же время их патогенные свойства и чувствительность к антибиотикам могут быть весьма разнообразными. Поэтому для характеристики факультативно-анаэробной части микроценоза, а также микроаэрофилов (в первую очередь лактобацилл), которые по морфологии могут быть сходными с многими видами облигатно-анаэробных бактерий (клостридии, эубактерии, пропионибактерии и др.), необходимо культуральное исследование – посев вагинального отделяемого. Для этих целей используют 5 % кровяной агар (наиболее универсальная среда для большинства УПМ), агар Сабуро (для выделения грибов), среду МРС (для культивирования лактобацилл).

Результаты культурального исследования дают возможность оценить видовой состав и количественное соотношение различных видов в ассоциации микроорганизмов, в том числе грибов, а также лактобацилл, и тем самым подтвердить принадлежность к роду лактобацилл тех лактоморфотипов, которые были обнаружены при микроскопии граммазков. Выделение из патологического материала и идентификация различных видов семейства Enterobacteriaceae, стафилококков, стрептококков, неферментирующих бактерий, нейссерий, коринебактерий, грибов и других микроорганизмов после количественной оценки их роста позволяет определить степень их этиологической значимости в развитии заболеваний у конкретного пациента.

Кроме того, в случаях когда диагноз кандидоза установлен при микроскопии грамотрицательного мазка, результаты посева могут выявить повышенные титры УПМ (грибы, энтерококки, колиформные и другие бактерии), которые могут стать причиной осложнений после этиотропной терапии препаратами с антианаэробной активностью. Особенно следует иметь в виду микроорганизмы, которые даже в низких концентрациях служат фактором повышенного риска для внутриутробного плода (листерии, стрептококки групп А и В).

Материалом для исследования служат выделения из мочеиспускательного канала, шейки матки, влагалища, глотки, прямой кишки. Метод характеризуется высокой точностью. Его называют «золотым стандартом», так как метод определяет небольшие концентрации возбудителей в материале пациента, определяет именно жизнеспособные микроорганизмы, позволяет определять чувствительность микроорганизмов к антибактериальным препаратам. Чувствительность и специфичность метода составляет 80 – 90 %.

Серьезным недостатком этого метода является то, что он занимает очень много времени (ряду микроорганизмов необходимо для роста несколько дней или даже недель).

Метод требует наличия качественных питательных сред, специальные условия культивирования для разных микроорганизмов. Некоторые микроорганизмы являются труднокультивируемыми или некультивируемыми, требуемые к питательным средам (это характерно для внутриклеточных и вирусных инфекций).

Рисунок 1 – Хламидии культуральным методом

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Page 2

Важный этап микробиологического исследования как при диагностике ИППП, так и оппортунистических инфекций. Позволяет дать предварительную оценку качественному и количественному составу микрофлоры в патологическом очаге, оценить качество взятия материала (соответствие его очагу воспаления, например присутствие вагинального эпителия в мазках, взятых из цервикального канала, свидетельствует о нарушении правил отбора биопробы), а также выявить микроорганизмы, не растущие на обычных питательных средах (гонококки, трихомонады, строго анаэробные бактерии).

Чувствительность метода световой микроскопии находится на уровне выявления микроорганизмов в количестве 4 – 5 lg КОЕ/мл и более. Поэтому этиологически значимые микроорганизмы в ряде случаев могут быть обнаружены уже при микроскопии. Это в первую очередь относится к строго анаэробным бактериям, обычно с низкими патогенными возможностями, их этиологическая роль проявляется при высоком количественном уровне после накопления в очаге инфекции.

Однако большинство факультативно анаэробных УПМ не имеют морфологического своеобразия, а степени их патогенности и чувствительность к антибиотикам, напротив, чрезвычайно разнообразна.

Диагностика кандидоза чаще всего может быть осуществлена при микроскопии мазка отделяемого слизистых оболочек по обнаружению в окрашенных или нативных мазках элементов гриба: почкующихся дрожжевых клеток, фрагментов псевдомицелия с бластоспорами. Обнаружение в мазках элементов гриба свидетельствует об их большом количестве (более 4 – 5 lg КОЕ/мл) и чаще всего сопровождается выраженной лейкоцитарной реакцией в мазке и клиническими проявлениями воспалительного процесса, что достаточно для подтверждения клинического диагноза кандидоза.

При лабораторной диагностике гонореи в первую очередь проводят микроскопию мазков, взятых из уретры и цервикального канала (если нет показаний для обследования других локусов: глотки, конъюнктив, прямой кишки). Следует стараться сделать параллельно по 2 мазка из каждого локуса для окраски синькой и по Граму. Для острой гонореи характерно отсутствие или скудное количество представителей нормальной микрофлоры (лактобацилл), большое количество нейтрофильных лейкоцитов и наличие грамотрицательных диплококков, расположенных внутри лейкоцитов (с явлением незавершённого фагоцитоза) и вне лейкоцитов. Для хронической гонореи характерно наличие разнообразной микрофлоры наряду с грамотрицательными диплококками вне и внутри лейкоцитов и большое количество нейтрофилов. Чаще всего диагноз гонореи может быть установлен на основании микроскопии мазков, окрашенных по Граму. Однако у беременных, подростков и детей обязательно культуральное исследование с видовой идентификацией Neisseria gonorrhoeae для дифференцирования от непатогенных нейссерий.

Микроскопический метод остаётся в настоящее время основным в диагностике урогенитального трихомониаза. Проводят исследование нативного препарата и/или окрашенного мазка. При микроскопии нативного препарата важно помнить, что исследованию подлежит свежевзятый материал – в препарате выявляют живые, подвижные трихомонады. Для этого готовят препарат по методу «раздавленной» капли (взятое отделяемое с добавлением тёплого, близкого к температуре тела 0,9 % раствора натрия хлорида накрывают покровным стеклом) или «висячей» капли (суспензию из взятых выделений помещают в лунку предметного стекла) и микроскопируют при увеличении в 400 раз при опущенном конденсоре. Из этого же материала готовят препараты для окраски метиленовым синим, по Граму или по Романовскому-Гимзе. Диагноз устанавливают на основании выявления в мазках типичных форм влагалищных трихомонад.

При подозрении на сифилис не потеряли своего диагностического значения тёмнопольная микроскопия и метод прямой иммунофлюоресценции с использованием АТ-диагностикумов к Т. pallidum. Эти методы используют в случаях с клиническими проявлениями на коже и слизистых оболочках, подозрительными на сифилис. Кроме того, препараты для микроскопии можно приготовить из пунктатов регионарных лимфатических узлов, спинномозговой жидкости, амниотической жидкости. Требуется определённый опыт, чтобы дифференцировать при микроскопии бледную трепонему от трепонем комменсалов урогенитального тракта.

Более объективной может быть диагностика при микроскопии препаратов с помощью прямой иммунофлюоресценции. В этих случаях взятое на предметное стекло отделяемое из любых тканевых жидкостей, поверхностей патологических участков (в том числе аутопсийного материала) высушивают на воздухе, фиксируют этанолом или метанолом. После этого на препарат наносят специфический к Т. pallidum антитрепонемный глобулин. При микроскопии препарата возбудитель выявляют по яркозелёной специфической флюоресценции.

Иммунолюминесцентный метод – основной и в лабораторной диагностике, при этом в препарате из патологического материала выявляют Аг вируса. Обычно используют метод прямой иммунофлюоресценции, позволяющий определять как оба типа ВПГ, так и отдельно серотипы ВПГ1 и ВПГ2. Чувствительность и специфичность метода зависят от качества используемых диагностикумов. Материал берут бактериологической петлёй или специальным тампоном и переносят на предметное стекло.

При урогенитальном хламидиозе выявление Аг хламидий с помощью иммунофлюоресцентной микроскопии служит одним из ведущих лабораторных методов диагностики. Обычно используют прямую иммунофлюоресценцию, при проведении которой применяют моноклональные АТ к разным Аг хламидий – липополисахаридному (групповому), основному белковому видовому Аг наружной мембраны хламидий, а также АТ к рекомбинантным Аг хламидий. Качество диагностикумов определяет степень чувствительности метода. Большое значение при оценке результатов прямой иммунофлюоресценции имеет качество взятия материала: в мазке на стекле пробы, должны присутствовать цилиндрические эпителиальные клетки и отсутствовать клетки плоского эпителия, эритроциты и лейкоциты. Результат считают положительным, если в мазках с помощью люминесцентного микроскопа на оранжевокоричневом фоне эпителиальных клеток обнаруживают не менее 5 элементарных телец при увеличении 100 крат. Из-за возможных ложноположительных результатов этот метод не рекомендуют для исследования материалов, полученных из носоглотки и прямой кишки.

Микроскопия подразделяется на два вида:

1. Световая микроскопия. Метод является самым простым и наиболее доступным, основан на исследовании нативных или окрашенных препаратов (мазков) в светооптическом микроскопе (рис. 2).

Рисунок 2 – Микроскопия гонококка, окраска по Граму

2. Флуоресцентная микроскопия. ПИФ (реакция прямой иммунофлуоресценции) – выявление антигенов возбудителя в мазках с помощью специфических антител (рис. 3).

Рисунок 3 – Бледные трепонемы в темном поле

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Page 3

Методы выявления ДНК и РНК-возбудителей в настоящее время применяют в основном для диагностики вирусных инфекций. Методы генной диагностики базируются на выявлении нуклеотидных последовательностей непосредственно в патологическом материале с помощью молекулярных зондов – искусственно полученных нуклеиновых кислот, комплементарных вирусным нуклеиновым кислотам и меченных биотином или радиоактивной меткой.

Особенность метода ПЦР – многократное копирование (амплификация, репликация) с помощью фермента ДНК-полимеразы определённого фрагмента ДНК, состоящего из нескольких десятков или сотен нуклеотидных пар, который уникален, то есть специфичен для данного вида вируса возбудителя. Механизм репликации таков, что достраивание фрагмента может начаться только в определённых стартовых блоках, для создания которых в заданных участках ДНК

используют затравки (праймеры) – специально синтезированные олигонуклеотиды. Праймеры комплементарны последовательностям в пределах границ специфического фрагмента, и синтез ДНК протекает только в этих границах.

Процесс ПЦР заключается в большом числе циклов синтеза (амплификации) специфического фрагмента ДНК, накоплении большого числа копий, которые затем могут быть выявлены обычными методами детекции (иммунофлюоресцентный анализ, электрофорез).

По чувствительности ПЦР наиболее совершенен как диагностический метод (на несколько порядков выше, чем другие тесты). Специфичность метода также высока, но пока большинство тест-систем недостаточно надёжны, чтобы вытеснить классические методики при диагностике даже абсолютных патогенов.

Что касается оппортунистических инфекций, то значение молекулярно-генетических методов диагностики пока нельзя признать сколько-нибудь значимыми, так как определяющим моментом в развитии таких воспалительных процессов служит количественный фактор, а не само по себе присутствие микроорганизма в обследуемом локусе.

В настоящее время ПЦР-методы широко используют в диагностике вирусных, паразитарных и бактериальных ИППП, чаще в качестве первичного скрининга, а также контроля излеченности в сочетании с другими методами лабораторной диагностики.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Page 4

Методы, выявляющие специфические АТ и Аг возбудителей. Важна их роль особенно в тех случаях, когда выделение возбудителя представляет значительные трудности. При выявлении специфических АТ необходимо установить повышение их титров, в связи с чем исследуют парные сыворотки с интервалом 2 – 3 нед. Определение классов иммуноглобулинов чётко характеризует этапы инфекционного процесса и в ряде случаев может служить прогностическим признаком его течения.

Большое значение имеют методы выявления Аг возбудителей. Их можно обнаружить уже на самых ранних этапах инфекционного процесса, что делает возможной экспресс-диагностику, а количественное определения Аг в динамике заболевания служит критерием эффективности проводимого лечения.

Ведущее значение приобрели серологические методы в диагностике сифилиса и ВИЧ-инфекции. В диагностике ВИЧ-инфекции обычно используют иммуноферментный анализ, позволяющий получить положительные результаты исследования уже через 1 – 1,5 мес. после заражения. Положительные результаты скрининга с использованием иммуноферментного анализа требуют подтверждения методом иммуноблота, который позволяет верифицировать АТ к различным вирусным белкам.

При диагностике сифилиса в настоящее время используют разнообразные серологические методы, позволяющие выявлять в организме АТ к различным Аг детерминантам T. pallidum. В зависимости от используемого Аг серологические реакции делят на две группы: трепонемные и нетрепонемные. Первые используют для скрининга. Они технически просты в исполнении, не требуют много времени, возможен количественный вариант реакции с определением титра АТ, что позволяет использовать их для оценки эффективности проводимого лечения. Однако эти тесты не позволяют обнаружить АТ в первые 2 – 4 нед. первичного сифилиса, а также возможны ложноположительные и ложноотрицательные реакции.

Трепонемные тесты обладают высокой специфичностью и позволяют подтвердить результаты нетрепонемных тестов. Но трепонемные тесты оказались недостоверными при исследовании спинномозговой жидкости (кроме реакции прямой гемагглютинации), их также не используют в качестве контроля эффективности лечения и не исключена возможность ложноположительных реакций.

При оппортунистических бактериальных инфекциях, возбудители которых имеют много общих Аг с тканевыми Аг организма хозяина и служат слабыми стимуляторами выработки специфических АТ, серологические методы диагностики практически не используют.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Page 5

Среди множества методов, которыми располагает социальная медицина и организация здравоохранения (исторический, социологический, экономического анализа, экспериментальный, медико-географический, экспертных оценок и др.), статистический метод занимает особое место. Он является универсальным методом, которым пользуются во всех областях науки, техники, народного хозяйства, в том числе в медицине и здравоохранении. Пользуются там, где изучаются массовые явления.

Статистическая совокупность – это группа, состоящая из большого числа относительно однородных элементов (единиц наблюдения), взятых вместе в известных границах времени и пространства. Выделяют две разновидности статистических совокупностей: совокупность среды и совокупность явления.

Совокупность среды представлена абсолютным числом различных контингентов населения. Примерами такой совокупности могут быть трудящиеся в масштабах государства или одного предприятия, цеха, одной профессии; больные, состоящие под диспансерным наблюдением или госпитализированные в стационар; женщины определенной возрастной группы; дети, родившиеся живыми или мертвыми и т. д.

Совокупность явлений представлена абсолютным числом изучаемых явлений. Например, число всех случаев зарегистрированных заболеваний среди жителей определенной административной территории; число случаев рождений среди женщин определенной возрастной группы; число зарегистрированных браков или разводов среди населения; число патологических или морфо-функциональных отклонений выявленных на медицинском осмотре и т. д.

Статистическая совокупность, подлежащая изучению является объектом наблюдения. Иначе говоря, это среда, в которой будут изучены те или другие явления.

В каждой статистической совокупности есть единица наблюдения. Единица наблюдения (счетная единица) – наименьшая составная часть статистической совокупности, подлежащая отдельной регистрации.

В данной работе совокупность среды – это возрастная структура населения Мурманской области; совокупность явлений – совокупность всех случаев заболеваний населения урогенитальными инфекциями, единицей наблюдения – каждый случай заболевания, зарегистрированный в отчетном году по данному классу болезней.

Для оценки изучаемых массовых явлений, составляющих статистическую совокупность, используют статистические величины: абсолютные и производные. Производные величины – это величины, полученные из абсолютных величин с помощью математико-статистических методов обработки данных. Расчет показателя заболеваемости необходим для объективной оценки эпидемиологической ситуации и качества работы общей лечебной сети по своевременному выявлению больных.

Основными видами производных величин являются:

а) относительные;

б) средние;

в) специальные статистические показатели (коэффициенты).

Относительные и средние величины характеризуют уровень и объем изучаемого явления.

К относительным величинам относятся следующие показатели:

1. интенсивный (показатель частоты);

2. экстенсивный (показатель структуры или удельного веса).

Интенсивные показатели – характеризуют частоту (уровень, интенсивность – это все синонимы) распространения явления в среде, в которой оно происходит, с которой оно непосредственно, органически связано, как бы порождается, продуцируется этой средой.

При вычислении необходимо иметь две статистические совокупности; совокупность явления и совокупность среды, его продуцирующей.

Рассчитывается по следующей формуле:

В данной работе мы проводили вычисления следующих интенсивных показателей: заболеваемость населения по инфекциям, возрастная структура заболеваемости населения Мурманской области.

Экстенсивные показатели - показывают, как распределяется изучаемое явление на свои составные части, как велика отдельная доля данного явления по отношению ко всей его величине (отношение части к целому), т. е. вся совокупность принимается за 100 %, а входящие в нее статистические единицы будут составлять часть от 100 % и выражаются в процентах.

Экстенсивные показатели в нашей работе – общая заболеваемость населения, социальная структура заболеваемости населения Мурманской области, половая структура населения Мурманской области.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Page 6

В настоящее время существует множество методов лабораторной диагностики инфекций, передающихся половым путем.

Таблица 1 – Методы диагностики некоторых ИППП

Инфекция Методы диагностики
Сифилис РИФ, РИБТ, РИП, ТРПГА, ИФА, ПЦР, ИБ
Гонорея Общий мазок, выделение чистой культуры, РСК, ПЦР, ЛЦР
Хламидиоз Общий мазок, РИФ,ИФА, ПЦР, ЛЦР
Трихомоноз Общий мазок, посев на флору, ПЦР, ПИФ
Кандидоз РИМ, РИФ, ИФА, РАГА, ПЦР

В таблице 1 представлены методы диагностики таких половых инфекций, как сифилис, гонорея, хламидиоз, трихомоноз и кандидоз. Инфекции имеют множество методов обнаружения, однако не всегда необходимо применение тех или иных диагностических методов в определенных ситуациях. Обычно для точного подтверждения диагноза используется в среднем 2 – 3метода, при этом для каждой инфекции имеется достаточно большое их количество.

Рациональна следующая система скрининга пациента на наличие сифилиса: обследование, использование нетрепонемных (реакция Вассермана, РИБТ) или трепонемных тестов (РПГА, ИФА), в случае положительного или сомнительного результата – повторное исследование для исключения внутрилабораторной ошибки, далее образцы исследуются в иммуноблоте (для подтверждения специфичности).

Оптимальным для гонореи является проведение бактериоскопии (то есть после окрашивания препарат исследуют под микроскопом) с окраской по Граму в сочетании с культуральным методом. ПЦР-диагностика также применяется для точной идентификации возбудителя и входит в программу диагностики инфекционного заболевания.

Такая комбинация методов обеспечивает высокие показатели чувствительности и специфичности. Специфичность бактериоскопического исследования достигает 96 – 99 %, это связано с тем, что данная бактерия имеет четкую морфологическую форму (в виде кофейного зерна), поэтому под микроскопом ее можно довольно точно определить.

Что касается диагностики хламидиоза, то здесь, по-прежнему, «золотым стандартом» считается культуральный метод. Чувствительность этого метода может быть повышена за счет пересевания, но даже в этом случае чувствительность метода составляет 60 – 90 %. Однако для точного выявления хламидий помимо культурального метода также необходимо использовать прямую иммунофлуоресценцию (исследование препарата под микроскопом с использованием специфических антител к антигенам) и полимеразно-цепную реакцию. Применяется и еще один метод диагностики – иммуноферментный анализ на наличие в крови специфических антител. При этом, в отличие от всех других ИППП, только для хламидий имеет смысл проводить иммуноферментный анализ на наличие в крови специфических антител, поскольку во всех остальных случаях генерализованный иммунный ответ на инфекцию возникает чрезвычайно редко.

Рекомендуемый алгоритм обследования на трихомониаз, по сути, ничем не отличается от алгоритма обследования на гонорею, представляя собой сочетание микроскопии и культурального метода, которое с наибольшей вероятностью обеспечивает получение достоверного положительного или отрицательного ответа при любой форме течения трихомонадной инвазии.

Ложноотрицательные результаты микроскопического исследования на влагалищные трихомонады неизбежны при безупречном проведении анализа, поскольку чувствительность этого метода даже в вагинальных препаратах составляет 40 – 80 %, а в цервикальных мазках это простейшее обнаруживается у 60 % пациенток с трихомониазом.

«Золотым стандартом» для выявления трихомонад считается культуральный метод. К существенным недостаткам этого метода можно отнести – длительность проведения анализа и дороговизна. Кроме того есть ограничения по жизнеспособности самих исследуемых патогенов.

Наиболее достоверные результаты обследования на трихомонаду могут быть получены при сочетании как минимум двух методов: микроскопия мазка, культуральный метод или микроскопия мазка и ПЦР.

Иммунофлуоресцентный анализ также используется для диагностики трихомониаза, однако отрицательный результат при использовании этого метода не является абсолютным, необходимо проводить дополнительные исследования.

Для диагностики кандидоза используется метод микроскопии мазков вагинального отделяемого в нативных и окрашенных по Грамму препаратах, что позволяет определить наличие гриба, его мицелия или спор; выявить наличие микробов-ассоциантов; определить принадлежность к облигатно-анаэробным видам или лактабактериям.

Культуральный метод позволяет определить родовую и видовую принадлежность грибов, их чувствительность к антифунгальным препаратам, выявить степень колонизации, наличие сопутствующей бактериальной флоры.

ПЦР применяется для диагностики диссеминированных и глубоких форм заболевания (кандидоз), то есть анализ проводится совместно с исследованием крови, биоптатов глубоких тканей, стерильных сред организма.

Иммуноферментный анализ (ИФА) позволяет провести распознавание смешанных инфекций, которые вызваны бактериями и грибами рода Candida. Таблица 2 – Методы диагностики половых инфекций и их свойства

Название метода Время проведения Чувствительность (%) Специфичность (%) Цена (руб)
Микроскопия мазка 2-3 часа 60-70 Около 70 350-600
Выделение вируса в культуре клеток От 2 до 20 дней Около 100 2000-3000
Прямая иммунофлюоресценция (ПИФ) 6 часов 65-70 Около 90
Иммуноферментный анализ (ИФА) 1 день Более 90 96–100
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) 3-6 часов 400-600
Реакции агглютинации 1 день 65-70 Около 90 300-700
Реакция связывания комплемента (РСК) 2 дня 65-70 Около 90
ДНК-гибридизация 5-7 дней 65-70 Около 90
Лигазно-цепная реакция (ЛЦР) Около 3 часов 94,7 99,8 -
Реакция имунной флуорисценции (РИФ) Несколько дней 98,5 99,6
Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ) До нескольких месяцев
Иммунный блот (ИБ) Несколько дней до 100

Таблица 2 содержит данные о свойствах основных методов диагностики инфекций передающихся половым путем.

Самыми распространенными и обладающими универсальностью методами являются микроскопия, культуральный метод и полимеразно-цепная реакция. Однако применение микроскопии часто не представляется возможным из-за особенности организации некоторых возбудителей заболеваний, недостаточным их окрашиванием или малыми размерами микроорганизмов. При этом такие свойства, как чувствительность и специфичность, не превышают 70 %.

Культуральный метод, в свою очередь, обладает почти стопроцентной специфичностью и высокой чувствительностью, но, при всей его точности, метод имеет ряд недостатков. Длительность времени проведения и дороговизна делает выделение вируса в культуре клеток проблематичным.

Следует отметить, что, несмотря на относительную дешевизну, чувствительность, специфичность и быстрые сроки некоторых методов, для получения непосредственного результата необходимо сочетание нескольких из них, кроме того, методы идентификации могут быть неприменимы для всех половых инфекций, что также стоит учитывать исходя из специфики и вида микроорганизма.

Таким образом, для точной и эффективной диагностики ИППП необходимо сочетание нескольких методов, поскольку некоторые из них способные выдавать ложноположительные или ложноотрицательные результаты в зависимости от стадии развития заболевания или наличия смешанных инфекций. Однако наиболее универсальным и точным и для непосредственной идентификации методом является ПЦР.

Преимущества метода ПЦР как метода диагностики инфекционных заболеваний:

1. Прямое определение наличия возбудителей. Многие традиционные методы диагностики, например иммуноферментный анализ, выявляют белки-маркеры, являющиеся продуктами жизнедеятельности инфекционных агентов, что дает лишь опосредованное свидетельство наличия инфекции. Выявление специфического участка ДНК возбудителя методом ПЦР дает прямое указание на присутствие возбудителя инфекции.

2. Высокая специфичность. Высокая специфичность метода ПЦР обусловлена тем, что в исследуемом материале выявляется уникальный, характерный только для данного возбудителя фрагмент ДНК. Специфичность задается нуклеотидной последовательностью праймеров, что исключает возможность получения ложных результатов, в отличие от метода иммуноферментного анализа, где нередки ошибки в связи с перекрестно-реагирующими антигенами.

3. Высокая чувствительность. Метод ПЦР позволяет выявлять даже единичные клетки бактерий или вирусов. ПЦР-диагностика обнаруживает наличие возбудителей инфекционных заболеваний в тех случаях, когда другими методами (иммунологическими, бактериологическими, микроскопическими) это сделать невозможно. Чувствительность ПЦР-анализа составляет 10 – 1000 клеток в пробе (чувствительность иммунологических и микроскопических тестов примерно 105 клеток).

4. Универсальность процедуры выявления различных возбудителей. Материалом для исследования методом ПЦР служит ДНК возбудителя. Метод основан на выявлении фрагмента ДНК или РНК, являющегося специфичным для конкретного организма. Сходство химического состава всех нуклеиновых кислот позволяет применять унифицированные методы проведения лабораторных исследований. Это дает возможность диагносцировать несколько возбудителей из одной биопробы.

5. Высокая скорость получения результата анализа. Для проведения ПЦР-анализа не требуется выделение и выращивание культуры возбудителя, что занимает большое количество времени.

6. Возможность доклинической и ретроспективной диагностики. ПЦР позволяет осуществить определение патогена или дефектного гена в организме ещё до развития заболевания.

7. Доступность метода.Стоимость проведения ПЦР-диагностики достаточно невысока, что позволяет практическому любому применить ее соответствующем медицинском центре или учреждении.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Page 7

Для диагностики урогенитальной кандидозной инфекции применяют микроскопические методы, культуральные методы с выделением дрожжеподобных грибов, идентификацией кандид до вида, проведением теста с определением чувствительности кандид к антимикотическим препаратам и молекулярно-биологические методы (ПЦР) выявления Candida albicans.

Материалом для исследования служит отделяемое влагалища, цервикального канала, уретры, а также моча. Необходимо помнить о возможности быстрого размножения гриба и начинать исследование как можно скорее после асептического взятия материала. Для взятия материала вагинальным тампоном или инокуляционной петлей в 10 мкл берется отделяемое из влагалищного свода и боковой стенки влагалища. Для микроскопического исследования материал помещается на два предметных стекла, для культуральной диагностики – в специальную транспортную среду.

Предпочтительным для лабораторной диагностики кандидозного вульвовагинита является микроскопический метод, поскольку у 20 % здоровых женщин во влагалище присутствуют кандиды, которые также вырастут при посеве, что даст основание для необоснованного диагноза кандидоза влагалища. Культуральный метод полезен при хроническом рецидивирующем течении заболевания, при изучении действия лекарственных препаратов, при атипичном течении заболевания, когда исключены другие возможные возбудители.

Для микроскопического исследования врач присылает в лабораторию препарат-мазок из отделяемого влагалища и пробирку с ватным тупфером, которым был взят материал с боковых или из заднего свода влагалища. Направляется также средняя порция свободно выпущенной мочи, взятая в стерильную пробирку.

Для микроскопии используют неокрашенные препараты, а также препараты, обработанные КОН, окрашенные по Граму, по Романовскому-Гимзе, метиленовым синим. В основе диагноза лежит обнаружение элементов гриба: единичных почкующихся клеток, псевдомицелия, других морфологических структур (бластоконидии, псевдогифы). Решение о значимости обнаруженных дрожжеподобных грибов принимает клиницист.

Следует подчеркнуть, что ПЦР для диагностики урогенитального кандидоза следует применять с осторожностью. Положительный результат исследования на наличие C. аlbicans, полученный методом ПЦР, может свидетельствовать только лишь о колонизации влагалища этими грибами и не является свидетельством наличия кандидоза.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Page 8

При легких вариантах кандидоза кожи и слизистых оболочек ограничиваются наружными лекарственными средствами: крем, суспензия пимафуцина, кремы и мази – микозолон, миконазол, эконазол, ламизил; раствор клотримазола; 5 – 20 % растворы тетрабората натрия (бура) в глицерине, 1 – 2 % водные и спиртовые растворы анилиновых красителей (бриллиантовый зеленый, метиленовый синий, генцианвиолет), микосептин, нистатиновая мазь и др. Препараты следует наносить на очаги поражения 2 раза в день (кремы и мази слегка втирать) до полного регресса клинических проявлений, затем, сократив аппликации до 1 в 2 – 3 дня, продолжить лечение еще 2 – 3 нед. При лечении острых форм урогенитального кандидоза также обычно ограничиваются местными лекарственными средствами.

Лечение хронического рецидивирующего урогенитального кандидоза должно быть комплексным: наряду с местным лечением, иммуно‑, витаминотерапией (группа В) назначают один из системных антимикотиков: кетоконазол (низорал, ороназол 0,2 г) по 1 таблетке 2 раза в сутки 5 дней; итраконазол (орунгал) по 200 мг в сутки 3 дня; флуконазол (дифлюкан – капсулы по 0,05 г; 0,15 г; 0,1 г; 0,2 г, раствор для внутривенного введения применяют однократно в дозе 150 мг); натамицин (пимафуцин 0,1 г) по 1 таблетке 4 раза в сутки в течение 7 – 12 дней; иногда местное лечение (1 % крем батрафен) сочетают с приемом внутрь одной капсулы (150 мг) флуконазола.

Профилактика кандидоза заключается в предупреждении его развития у лиц, входящих в группу риска, – больных с иммунодефицитными состояниями, болезнями крови, новообразованиями и другой тяжелой патологией, а также получивших ионизирующее излучение, прошедших массивное лечение антибиотиками, кортикостероидными гормонами и другими иммунодепрессантами. Особое внимание уделяется коррекции дисбактериоза кишечника, лечению половых партнеров при генитальном кандидозе, выявлению и лечению кандидоза у беременных и детей грудного возраста, исключению соответствующих вредностей на производстве (Иванов, 2007).

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

В основу работы положены статистические данные об уровне заболеваемости инфекций, передающихся половым путем, за период с 2010 по 2014 года.

Объектом исследования являлись жители Мурманской области, у которых обнаружились следующие ИППП: сифилис, гонококковая и хламидийная инфекции, трихомониаз и урогенитальный кандидоз.

Данные по статистике заболеваемости были предоставлены Мурманским областным Центром специализированных видов медицинской помощи.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Page 9

Исследование методов диагностики и статистических данных по заболеваемости ИППП в данной работе проводилось по следующей схеме:

Анализ заболеваемости инфекциями, передающимися половым путем среди населения Мурманской области за период с 2010 по 2014 гг.
Анализ литературных данных, формулирование цели и постановка задач исследования
Определение параметров эффективности методов диагностики ИППП
Срок выполнения Чувствительность Специфичность Цена
Объекты исследования: жители Мурманской области
2010 год 2011 год 2012 год 2013 год 2014 год
Отбор статистических данных
Расчет динамики заболеваний и их распространенность среди населения Мурманской области
Сифилис Гонорея Хламидиоз Трихомониаз Кандидоз
Анализ социальной, половой структуры заболевших сифилисом и гонореей
Сравнительный анализ полученных данных с заболеваемостью в Российской Федерации, построение диаграмм, формулирование выводов и заключения

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Page 10

У женщин при урогенитальном кандидозе поражаются наружные половые органы и влагалище. У мужчин – крайняя плоть и головка полового члена. Симптомы у женщин проявляются в виде жжения и зуда в области наружных половых органов. Наблюдаются выделения в виде творожистых масс из влагалища, боль при мочеиспускании и половом акте. У мужчин также появляются зуд и жжение в области головки полового члена и крайней плоти. Эти же органы краснеют, ощущается боль при мочеиспускании и при половом акте. Нужно отметить, что кандидоз у мужчин поражает мочеполовую систему и вызывает воспаление органов.

При поверхностных поражениях кожи отмечаются межклеточный отек эпидермиса, экзоцитоз с наличием возбудителя в утолщенном роговом слое, в дерме – неспецифический воспалительный инфильтрат. При гранулематозных формах в дерме наблюдаются гранулема с гигантскими клетками инородных тел, микроабсцессы с нейтрофильными гранулоцитами (Арифов, 2005).

Различают следующие формы кандидоза: кандидоз полости рта, кандидоз урогенитальный, кандидоз углов рта, кандидозный хейлит, кандидоз складок кожи, гладкой кожи, кандидозные онихия и паронихия, хронический генерализованный кандидоз (Иванов, 2007).

По клиническому течению выделяют несколько форм кандидозного вульвовагинита: острую (длительность заболевания до 2 мес.), хроническую рецидивирующую (длительность заболевания составляет более 2 мес. с 4 и более рецидивами вульвовагинита в течение 12 мес.) и кандидоносительство. При этом клиническая картина урогенитального кандидоза разнообразна и зависит от многих факторов – наличия сопутствующих соматических заболеваний, стадии патологического процесса, микробиоценоза влагалища, гигиенических навыков и др. Основные симптомы кандидозного кольпита: зуд и жжение в области промежности, вульвы и влагалища, творожистые выделения и наличие неприятного запаха из половых путей. Характерно усиление указанных симптомов во второй половине дня и в ночное время, во время менструаций, после полового акта, длительной ходьбы и т.д.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Page 11

Грибы рода Саndida относятся к условно‑патогенным микроорганизмам. У 30 – 50 % здоровых людей представителей рода Candida находят в полости рта и в ЖКТ (из них 60 – 80 % Candida albicans). У 20 % здоровых женщин представителей рода Candida находят во влагалище (из них 80 – 90 % – Candida albicans). Усиленный рост наблюдается при нарушениях иммунитета, в том числе местного, и при антибиотикотерапии.

Они широко распространены во внешней среде, вегетируют главным образом в почве лугов, садов и огородов, на коре фруктовых деревьев, а также на плодах, овощах и фруктах, особенно несвежих; легко обнаруживаются на предметах домашнего обихода, в первую очередь используемых при уходе за детьми грудного возраста. В качестве сапрофитов они обитают на кожных покровах и слизистых оболочках здорового человека; с разной частотой выделяются из экскрементов, мочи, мокроты, различных экскретов и ногтей.

Морфологически дрожжеподобные грибы Candida представляют собой одноклеточные организмы. Форма клеток округлая, удлиненная или овальная, размеры колеблются от 2 до 5 мкм в диаметре у молодых клеток до 16 мкм у старых. В клетке имеется оболочка, компактное ядро и цитоплазма, в которой определяются разнообразные включения (Родионов, 2000).

Дрожжеподобные грибы обладают способностью отпочковывать бластопоры. Длительно персистируя внутри эпителиальных клеток и даже размножаясь в них, окруженные плотной микрокапсулой грибы в определенной степени защищены от воздействия лекарственных средств, что может быть причиной неэффективности лечения. Грибы рода Саndida – аэробы. Для питания особенно охотно усваивают сахара, чем можно объяснить их тропизм к тканям, богатым гликогеном, и частый кандидоз при сахарном диабете. Оптимальная температура для роста грибов 21 –

27°С; они хорошо растут и при температуре 37°С; благоприятны для их размножения рН 5,8 – 6,5 и повышенная влажность: высушивание переносят хорошо; выдерживают конкуренцию со многими микроорганизмами на пищевых продуктах; при кипячении погибают в течение нескольких минут. Кандидоз может развиваться как при инфицировании извне, так и за счет собственных сапрофитов. Последний путь явно преобладает. При определенных условиях (экзогенных – механическая и химическая травмы, повышенная влажность и т.д.; эндогенных – иммунная недостаточность, детский и пожилой возраст, нарушение обмена веществ, сахарный диабет и другие эндокринные заболевания, гиповитаминозы, общие тяжелые инфекции, беременность, длительный прием кортикостероидов, антибиотиков и т.д.) грибы способны приобретать патогенные свойства. При этом бластоспоры гриба начинают интенсивно размножаться, формируя наряду с почкующимися клетками многочисленные нитчатые формы (псевдомицелий).

Патогенные клетки гриба прикрепляются к клеткам эпителия слизистой оболочки, внедряются в них, паразитируют в их цитоплазме и ядрах, разрушая клетку хозяина, стимулируют выработку в организме человека различных антител. Таким образом, кандидоз представляет собой у подавляющего большинства больных аутоинфекцию. Этим обстоятельством можно объяснить его многоочаговость и хроническое рецидивирующее течение.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Page 12

При лечении трихомоноза используются специфические противотрихомонадные средства, чаще всего антибактериального действия. Применяются они одновременно в общей и в местной терапии: общее применение лекарств от трихомоноза убивает трихомонады внутри организма, а местное применение антибиотиков устраняет такие симптомы трихомоноза как воспаление, раздражение, зуд и так далее. Местное лечение используется только дополнительно, сам по себе оно не столь действенно.

По окончании лечения трихомоноза через 7 – 8 дней и еще дважды с месячным интервалом проводятся контрольные анализы, при которых используется метод ПЦР.

Больные считаются этиологически излеченными, когда при неоднократных повторных обследованиях после окончания комплексного лечения не удается обнаружить трихомонады в течение 1 – 2 мес. у мужчин и 2 – 3 мес. у женщин (Скрипкин, 2003).

Профилактика трихомоноза по большей части совпадает с профилактикой любых инфекций, передающихся половым путем. Для избежания попадания инфекции в организм необходимо исключить случайные половые связи, в особенности с группами риска, а также пользоваться презервативом.

Кандидоз

Кандидоз (син.: кандидамикоз, монилиаз) – заболевание кожи, слизистых оболочек и внутренних органов, обусловленное патогенным воздействием дрожжеподобных грибов рода Саndida.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

studopedia.ru

Культуральные исследования | Компания «Медицинский ответ»

Культуральное исследование (бактериологический посев) – метод лабораторной диагностики венерических и других заболеваний. Этот метод считается одним из самых точных способов диагностики, при котором биоматериал, который возможно содержит патогенные микроорганизмы, помещают в благоприятную для размножения этих организмов среду при определенных температурных режимах. На 7-10 день количество микробов увеличивается настолько, что специалист может определить по виду, цвету и форме этой колонии возбудителя инфекции.

Кроме того, культуральные исследования позволяют определить чувствительность инфекции к антибиотикам. Результаты анализа на определение чувствительности необходимы для того, чтобы врач смог правильно выбрать ту или иную схему лечения. Без таких сведений выздоровление пациента не гарантировано, поскольку антибактериальные средства могут оказаться недейственными. Анализ на чувствительность к антибиотикам позволяет определить, какое именно лекарство способно убить инфекцию.

Для посева обычно используют материал из влагалища, мочеиспускательного канала, шейки матки, гортани и прямой кишки. Точность культурального исследования достигает 95-100 процентов.

02 декабря 2016

medre.ru

Культуральный метод исследования

⇐ Предыдущая45678910111213Следующая ⇒

2.1. Бактериологический (культуральный) метод- совокупность методик искусственного культивирования микроорганизмов на питательных средах в целях их идентификации. Современные методы изучения большинства биологических свойств бактерий возможны только при наличии чистой культуры.

Задачи культурального метода:

1) получение чистой культуры какого-либо вида (вара) из микробной ассоциации;

2) идентификация выделенной чистой культуры,

3) определение дополнительных свойств, например, чувствительности к антибиотикам, вирулентности.

Выполнение бактериологического метода исследования позволяет установить вид микроорганизма, обнаруженного в исследуемом материале, что важно в медицине для установления причина заболевания и назначения правильного лечения, а в других областях для понимания происходящих процессов. Бактериологический метод исследования выполняется в несколько этапов:

1) взятие материала и его доставка в бактериологическую лабораторию;

2) микроскопия исследуемого материала. Этот этап часто не выполняется, хотя предварительная микроскопия в ряде случаев дает ориентировочные сведения о возбудителе и позволяет выбрать необходимые для посева среды;

3) обработка исследуемого материала физическими или химическими факторами в целях удаления или уменьшения посторонней микрофлоры, т.е. обогащение исследуемого материала;

4) посев исследуемого материала на питательные среды с последующей инкубацией (1 - 2 суток) для получения изолированных колоний;

5) исследование колоний. Для изучения выбирают однородные изолированные колонии, располагающиеся далеко от краев чашки и по штриху петли, окружают их чертой, нумеруют. Если исследование ведется не направленно (полиэтиологичный процесс и пр.), то на основании результатов визуального осмотра выбирают по 2-3 колонии всех имеющихся на чашке типов и делают с них мазки. При исследовании колоний, выросших на питательной среде отмечают наиболее важные признаки – цвет колонии, размер, влажность, форму края, форму поверхности и другие признаки, помогающие в дальнейшем идентифицировать выделенные бактерии;

6) пересев выбранных колоний на среды накопления для получения микробной массы, достаточной для идентификационных исследований. Для этого с остатка колоний, в мазке которой выявлены однородные по форме и окраске бактерии, петлей забирают часть культуры и засевают на скошенный в пробирке МПА или специальную среду штрихом; в процессе инкубации необходимо получить сплошной, а не изолированный, рост колоний;

8) определение чистоты выросшей на скошенных средах культуры путем макроскопического осмотра роста и микроскопии мазка из него;

9) идентификация выделенной чистой культуры и в случае необходимости (по требованию клинициста, эпидемиолога) определение различных биологических свойств;

10) заключение о видовой принадлежности выделенной культуры и ее свойствах.

⇐ Предыдущая45678910111213Следующая ⇒

Дата добавления: 2014-11-10; просмотров: 1817. Нарушение авторских прав

Рекомендуемые страницы:

studopedia.info

Культуральное исследование

Метод посева и выделения чистых культур возбудителей заболевания служит «золотым стандартом» микробиологической диагностики. Культуральное исследование наряду с микроскопией — основной метод при диагностике гонореи, трихомониаза, хламидиоза. Методы молекулярнобиологического исследования пока недостаточно специфичны для выявления этих возбудителей ИППП, чтобы вытеснить классические методы, но, несомненно, им принадлежит будущее. Другая ситуация сложилась с оппортунистическими инфекциями половых путей, число которых в эру антибиотиков и урбанизации жизни общества неуклонно увеличивается, динамично меняется их этиологическая структура и чувствительность к антибиотикам. Частая антибиотикорезистентность этих микроорганизмов становится причиной неэффективности лечения, поэтому адекватный выбор рациональной этиотропной терапии в современных условиях признают постоянной клинической проблемой.

Известно, что возбудителями воспалительных процессов половых органов могут быть разнообразные УПМ, в норме входящие в состав транзиторного компонента индигенной (нормальной) микрофлоры влагалища и прилегающих биотопов. Их патогенные свойства проявляются лишь в определённых условиях нарушения иммунного гомеостаза макроорганизма и местной колонизационной резистентности. В этих условиях микробиологическая диагностика должна учитывать возможную этиологическую роль широкого круга патогенов, а не только какоголибо конкретного возбудителя, как при диагностике классических инфекционных заболеваний, вызываемых абсолютными патогенами. Задачей исследования становится не только идентификация микроорганизмов, обнаруженных в патологическом материале, но и обоснование их этиологической роли в воспалительном процессе у данной больной. Поэтому при посеве клинического материала, особенно из локусов, и в норме имеющих микрофлору, очень важно использовать наиболее универсальные питательные среды, которые пригодны для культивирования широкого круга микроорганизмов. При этом необходимо учитывать количественные соотношения роста различных видов микроорганизмов в первичном посеве, так как истинному возбудителю чаще всего принадлежит превалирующая роль среди ассоциантов. Однако есть виды, которые и в небольшом количестве проявляют патогенные свойства (стрептококки групп А и В, протеи, клебсиеллы, золотистый стафилококк, листерии и др.).

Микробиологическая диагностика оппортунистических инфекций влагалища базируется на интегральной оценке результатов микроскопического и культурального исследований. При этом строго анаэробный компонент микрофлоры оценивают по микроскопии граммазков — большое количество анаэробных морфотипов, выявляемых при световой микроскопии (их количество в отделяемом влагалища превышает 6 lg КОЕ/мл), свидетельствует об их этиологической роли. При этом определение чувствительности анаэробов к антибиотикам в настоящее время не имеет клинической целесообразности, так как в подавляющем большинстве они высокочувствительны к антибиотикам с антианаэробной активностью (клиндамицин, метронидазол).

Напротив, что касается факультативноанаэробных и аэробных микроорганизмов, то диагностическая ценность микроскопического исследования вагинального отделяемого значительно снижается. Это связано, вопервых, с тем, что патогенные возможности этих бактерий могут проявляться при сравнительно небольшом (3–5 lg КОЕ/мл) их количестве, которое не выявляют при микроскопии. Вовторых, даже если морфотипы факультативноанаэробных бактерий обнаруживают в граммазках, морфологически они однотипны у многих видов и родов бактерий (это колиформные палочки или грамположительные кокки). В то же время их патогенные свойства и чувствительность к антибиотикам могут быть весьма разнообразными. Поэтому для характеристики факультативноанаэробной части микроценоза, а также микроаэрофилов (в первую очередь лактобацилл), которые по морфологии могут быть сходными с многими видами облигатноанаэробных бактерий (клостридии, эубактерии, пропионибактерии и др.), необходимо культуральное исследование — посев вагинального отделяемого. Для этих целей используют 5% кровяной агар (наиболее универсальная среда для большинства УПМ), агар Сабуро (для выделения грибов), среду МРС (для культивирования лактобацилл).

Результаты культурального исследования дают возможность оценить видовой состав и количественное соотношение различных видов в ассоциации микроорганизмов, в том числе грибов, а также лактобацилл, и тем самым подтвердить принадлежность к роду лактобацилл тех лактоморфотипов, которые были обнаружены при микроскопии граммазков. Выделение из патологического материала и идентификация различных видов семейства Enterobacteriaceae, стафилококков, стрептококков, неферментирующих бактерий, нейссерий, коринебактерий, грибов и других микроорганизмов после количественной оценки их роста позволяет определить степень их этиологической значимости в развитии вагинита у конкретной пациентки.

Кроме того, в случаях когда диагноз бактериального вагиноза установлен при микроскопии грамотрицательного мазка, результаты посева могут выявить повышенные титры УПМ (грибы, энтерококки, колиформные и другие бактерии), которые могут стать причиной осложнений после этиотропной терапии препаратами с антианаэробной активностью. Особенно следует иметь в виду микроорганизмы, которые даже в низких концентрациях служат фактором повышенного риска для внутриутробного плода (листерии, стрептококки групп А и В).

studfiles.net


Смотрите также